اڈینو وائرس ریپڈ ٹیسٹ- ناک کا اخراج

مطلوبہ استعمال:

SARS-CoV-2 نیوکلک ایسڈ ٹیسٹ کٹ کا اطلاق ناسوفرینجیل سویبس، اوروفرینجیل سویبس اور تھوک میں COVID-19 کے نیوکلک ایسڈ کی گتاتمک شناخت پر ہوتا ہے۔ ٹیسٹ کے نتائج انفیکشن یا مشتبہ مریضوں کے لیے سالماتی تشخیص کی بنیاد فراہم کرتے ہیں، اور اسے طبی تشخیص کے لیے واحد معیار کے طور پر استعمال نہیں کیا جانا چاہیے۔

مواد:

ٹیسٹ کا طریقہ کار:

A. نمونہ کی تیاری

نکالا ہوا RNA SARS-CoV-2 نیوکلک ایسڈ ٹیسٹ کٹ کے لیے ابتدائی مواد ہے۔

اہم: ہر نیوکلک ایسڈ نکالنے کے طریقہ کار کو ایک ساتھ ایک مثبت کنٹرول (40 μL، جراثیم سے پاک نمکین محلول/PBS کے ساتھ مطلوبہ حجم تک پتلا کریں) اور ایک منفی کنٹرول (40 μL، جراثیم سے پاک نمکین محلولوں/PBS سے مطلوبہ حجم تک پتلا کریں) کے ساتھ انجام دیا جانا چاہیے۔

مندرجہ ذیل کمرشل نیوکلک ایسڈ نکالنے کی کٹس استعمال کرنے کی سفارش کی جاتی ہے: PureLinkTM وائرل RNA/DNA Mini Kit (Invitrogen)؛ وائرل RNA منی کٹ (QIAGEN)؛ TIANamp Hi-DNA/RNA کٹ (TIANGEN)؛

B. ری ایکشن مکس سیٹ اپ

1. استعمال کرنے سے پہلے تمام ری ایجنٹس اور نمونوں کو مکمل طور پر پگھلایا جانا چاہیے، مکمل طور پر مکس کیا جانا چاہیے اور مختصر طور پر کمرے کے درجہ حرارت (تقریبا حد 18 سے 25 ڈگری) پر سینٹری فیوج کیا جانا چاہیے۔

2. مناسب سائز کی پولی پروپیلین مائکرو سینٹری فیوج ٹیوب میں ری ایکشن مکس کا مطلوبہ حجم تیار کریں۔

3. ایک مناسب آپٹیکل 96-وییل ری ایکشن پلیٹ یا مناسب آپٹیکل ری ایکشن ٹیوب کے ہر مطلوبہ کنویں میں 25 µL ری ایکشن مکس کریں۔

C. ٹیمپلیٹ کا اضافہ

1. نمونے/مثبت کنٹرول/منفی کنٹرول سے 5 μL نکالا ہوا RNA شامل کریں۔ کل حجم 30 μL ہے۔

2. ری ایکشن مکس کے ساتھ نمونے اور کنٹرول کو اوپر اور نیچے/ورٹیکس پائپ لگا کر اچھی طرح مکس کریں۔

3. مناسب ڈھکنوں یا آپٹیکل چپکنے والی فلم اور ری ایکشن ٹیوبوں کو مناسب ڈھکنوں کے ساتھ 96-کنویں کے رد عمل کی پلیٹ کو بند کریں۔

4. تقریباً 2500rpm پر 30 سیکنڈ کے لیے مائیکرو ٹائٹر پلیٹ روٹر کے ساتھ سینٹرفیوج میں 96- ویل ری ایکشن پلیٹ کو سینٹری فیوج کریں۔

D. ریئل ٹائم پی سی آر انسٹرومنٹ کی پروگرامنگ

مختلف ریئل ٹائم پی سی آر آلات کے سیٹ اپ اور پروگرامنگ کے بارے میں بنیادی معلومات کے لیے، براہ کرم متعلقہ انسٹرومنٹ کے یوزر مینوئل سے رجوع کریں۔ پرکھ کو ABI7500 ریئل ٹائم پی سی آر سسٹم کے لیے بہتر بنایا گیا ہے۔ PCR رن سائیکلنگ کے حالات کے ساتھ انجام دیا جاتا ہے جیسا کہ نیچے دیے گئے جدول میں بیان کیا گیا ہے۔

فلوروسینس ڈٹیکٹر کی وضاحت کریں۔

*براہ کرم آلہ کے فلوروسینس اندرونی حوالہ کو "کوئی نہیں" پر سیٹ کریں، مثال کے طور پر: ABI سیریز کے آلات کے لیے "غیر فعال حوالہ" کو "کوئی نہیں" پر سیٹ کریں۔

E. ڈیٹا کا تجزیہ

براہ کرم تجزیہ کے پیرامیٹرز مرتب کریں اور متعلقہ آلات کی آپریٹنگ ہدایات کے مطابق ڈیٹا کا تجزیہ کریں۔

ABI 7500 کو مثال کے طور پر لیں:

بیس لائن کو ایسی رینج پر سیٹ کیا جانا چاہئے جو ایمپلیفیکیشن کے ابتدائی چکروں میں پائے جانے والے بیک گراؤنڈ فلوروسینس کو ختم کردے، لیکن جو اس علاقے کو اوورلیپ نہیں کرتا ہے جہاں ایمپلیفیکیشن سگنلز پس منظر سے اوپر اٹھتے ہیں (شروع قدر:3~10؛ اختتامی قدر: {{2} })۔ سائیکل کی حد (Ct) ایکسپونینشنل مرحلے کی بنیاد میں ہونی چاہیے۔ تجزیہ کا نتیجہ خود بخود حاصل کرنے کے لیے "تجزیہ" پر کلک کریں، اور "رپورٹ" ونڈو میں پتہ لگانے کا نتیجہ پڑھیں۔

ڈاؤن لوڈ، اتارنا ٹیگ: اڈینو وائرس تیزی سے ٹیسٹ ناک کی رطوبت، چین، سپلائرز، مینوفیکچررز، فیکٹری، بلک